4．沉淀： 按异丙醇/上清=1:1的比例加入异丙醇
，上下颠倒混匀，-20℃放置30 min后 ，4℃
，12000 rpm 离心15 min。弃上清，异丙醇不要回流过多 ，可再短暂离心
，用移液器将剩余的异丙醇吸出 。

5．漂洗： 加入1 mL 75％乙醇，用手指将沉淀块弹起 ，上下颠倒几次，4℃
，12000 rpm 离心5 min
。弃上清，75％乙醇不要回流过多 ，可再短暂离心
，用移液器将剩余的75％乙醇吸出。

6. 风干，溶解： 超净台中自然干燥 5-10 min ，不要真空离心干燥
， RNA不要完全干透，以防不能完全溶解；用DEPC水溶解RNA ，60-65℃助溶 5-10 min 。

7. 定量： 进行Total RNA定量
，如果不马上定量，将样品贮存于-80℃。

RNA定量

我们一般通过Nanodrop紫外分光光度计测定RNA样本在260nm处的吸光值来计算RNA含量
。但是 ，DNA和RNA都有吸收紫外光的性质
，其性质是嘌呤环和嘧啶环的共轭双键系统所具有的，所以嘌呤和嘧啶以及一切含有它们的物质 ，不论是核苷、核苷酸或核酸都有吸收紫外光的特性。所以紫外法不能区分DNA和RNA，只能用来鉴定核酸的纯度和含量 。

Nanodrop紫外分光光度计可以得到以下参数：

OD230 ：杂质（酚 、糖原等碳水化合物）的吸光度；

OD260 ：核酸的吸光度；

OD280 ：蛋白质的吸光度；

OD260 /280 ：纯的RNA比值在1.5 ~2.1之间
，如果比值低，表示受到蛋白质的污染；

OD260 /230 ：纯的RNA比值在2.0 ~2.5之间 ，如果比值低
，表示受到有机物如